通用PCR試劑盒的質(zhì)量?jī)?yōu)劣辨別介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：814 更新時(shí)間：2020-06-18
通用PCR試劑盒是通過酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)特定物質(zhì)的試劑盒，試劑盒中會(huì)有不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，在酶標(biāo)條中通過固相的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶作用的底物反應(yīng)可形成標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而進(jìn)行試驗(yàn)樣品的測(cè)定。
今天小編要為您介紹的是辨別通用PCR試劑盒優(yōu)劣的方法：
1. 選定一個(gè)檢測(cè)范圍內(nèi)的濃度做多孔重復(fù)，可看出平行性好不好。即板內(nèi)CV值的大小，此操作時(shí)需要小心加樣的準(zhǔn)確性。對(duì)一些制作較粗糙的試劑盒來說，板間CV值是較大的。
2. 可采用已知濃度的重組細(xì)胞因子，稀釋到檢測(cè)范圍內(nèi)作為樣本加入，看檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
3. 對(duì)用待測(cè)指標(biāo)的重組細(xì)胞因子做試劑盒說明書上標(biāo)定的zui小濃度稀釋，可測(cè)出靈敏度，建議5個(gè)復(fù)孔以上才有意義。一般以20個(gè)復(fù)孔做出的結(jié)果作為檢測(cè)限。用此實(shí)驗(yàn)可驗(yàn)證出所購試劑盒的靈敏度是否如說明書所述，也可判斷出所購試劑盒是否有夸大之說。
4. 如果有相同指標(biāo)的通用PCR試劑盒，可用對(duì)方的標(biāo)準(zhǔn)品作為樣本，分別加入各自的試劑盒做檢測(cè)，以檢測(cè)試劑盒的真實(shí)性，準(zhǔn)確性。如其中一種是的，比較可靠的話，可作為標(biāo)準(zhǔn)來驗(yàn)證另一試劑盒的準(zhǔn)確程度。
在進(jìn)行通用PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)，各項(xiàng)條件的選擇也是非常重要的：
1、包被抗體的選擇：將抗體吸附在固相載體表面的時(shí)候，一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度，進(jìn)行包被后，當(dāng)其它試驗(yàn)條件大致一樣的情況下，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇蛋白量少，OD值大的濃度。
2、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體，在使用前進(jìn)行篩選：在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)的均一性如何，以此來判斷其吸附性能是否良好。
