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這樣使用染料法PCR試劑盒準沒錯
點擊次數(shù):843 更新時間:2020-01-09
  染料法PCR試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學檢驗的各領(lǐng)域中。
  小編受到了很多消息都是問染料法PCR試劑盒如何清洗,今天小編就為大家解答一下。
  染料法PCR試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA),已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
  自備材料
  1. 蒸餾水。
  2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
  3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
  安全性
  1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
  2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
  3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
  順便在為大家重復一下染料法PCR試劑盒的使用方法:
  1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
  5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  在進行染料法PCR試劑盒實驗時,各項條件的選擇也是非常重要的:
  1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體,在使用前進行篩選:在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)的均一性如何,以此來判斷其吸附性能是否良好。
  2、包被抗體的選擇:將抗體吸附在固相載體表面的時候,一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度,進行包被后,當其它試驗條件大致一樣的情況下,觀察陽性標本的OD值。選擇蛋白量少,OD值大的濃度。
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