ELISA試劑盒的使用簡(jiǎn)單而又不簡(jiǎn)單
點(diǎn)擊次數(shù)：903 更新時(shí)間：2019-03-21
ELISA試劑盒的使用簡(jiǎn)單而又不簡(jiǎn)單
elisa試劑盒是一種敏感性高，重復(fù)性好，特異性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)診斷方法。因?yàn)樗噭┓€(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中已經(jīng)得到了廣泛的使用。
在進(jìn)行
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)，各項(xiàng)條件的選擇也是非常重要的：
?。?）、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體，在使用前進(jìn)行篩選：在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)的均一性如何，以此來(lái)判斷其吸附性能是否良好。
?。?）、包被抗體的選擇：將抗體吸附在固相載體表面的時(shí)候，一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度，進(jìn)行包被后，當(dāng)其它試驗(yàn)條件大致一樣的情況下，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇蛋白量少，OD值大的濃度。
?。?）、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法”在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定濃度。
?。?）、
ELISA試劑盒后還有酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、而本身無(wú)色。在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)要注意號(hào)防護(hù)措施，因?yàn)橛行┕潴w有可能存在著的致癌作用。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體。等底物作用了一段時(shí)間后，加入強(qiáng)酸堿的物質(zhì)終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制。
