ELISA試劑盒的使用簡單而又不簡單
點擊次數(shù)：832 更新時間：2019-03-21
ELISA試劑盒的使用簡單而又不簡單
elisa試劑盒是一種敏感性高，重復(fù)性好，特異性強的實驗診斷方法。因為它試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中已經(jīng)得到了廣泛的使用。
在進行
ELISA試劑盒實驗時，各項條件的選擇也是非常重要的：
?。?）、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體，在使用前進行篩選：在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)的均一性如何，以此來判斷其吸附性能是否良好。
?。?）、包被抗體的選擇：將抗體吸附在固相載體表面的時候，一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度，進行包被后，當(dāng)其它試驗條件大致一樣的情況下，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇蛋白量少，OD值大的濃度。
?。?）、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法”在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定濃度。
?。?）、
ELISA試劑盒后還有酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、而本身無色。在進行試驗時要注意號防護措施，因為有些供氫體有可能存在著的致癌作用。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體。等底物作用了一段時間后，加入強酸堿的物質(zhì)終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制。
